http://www.joimr.org/phorum/read.php?f=2&i=48&t=48

JOURNAL OF INDEPENDENT MEDICAL RESEARCH 2003;1(5):1

Бактерии при саркоидозе и обоснование для антибиотикотерапии этой болезни

Alan R Cantwell, Jr., M.D.
Los Angeles, California, email: AlanRCan @aol.com

Введение

Саркоидоз рассматривается как болезнь неизвестной этиологии. Однако, имеется внушительное количество литературы, предполагающей, что саркоидоз является микробной инфекцией, связанной с L-формами бактерий (CWD) . Среди наиболее важных исследований - обнаружение CWD микобактерий при саркоидозе Judge и Mattman [1] и гистологические исследования Moscovic, продемонстрировавшие микобактериальные L-формы in vivo (то есть в пределах тела) в лимфатических узлах пациентов с саркоидозом [2].

Саркоидоз - системная болезнь, характеризованная формированием гранулем и частого вовлечения легких и лимфатических узлов. В этом отношении, болезнь имеет некоторое подобие с туберкулезом (TB) и лепрой (болезнь Хансена). И TB и лепра вызваны кислотостойкими микобактериями: TB вызывается Mycobacterium tuberculosis, лепра M. leprae.

Согласно Moscovic, '' Одно из самых старых клинических наблюдений относительно саркоидоза и TB - что одна болезнь может превратиться в другую, и иногда эти две болезни могут сосуществовать у одного индивидуума. Случаи саркоидоза, изменившегося в туберкулез, который затем снова возвратился к саркоидозу, также известны [3]''.

Гистологические исследования CWD бактерий при саркоидозе

В 1970-х Moscovic с коллегами представили гистологические и иммунологические доказательства наличия в саркоидных лимфатических узлах ''плеоморфных'', крошечных ''круглых тел'', больших ''дрожже-подобных (yeast-like) тел'' и ''вакуолизированных форм'', суггестивных для микобактерия-подобных CWD микроорганизмов [2,3].

Мое исследование роли CWD бактерий при саркоидозе развилось из исследования роли CWD бактерий в дерматологических болезнях неизвестной этиологии [6] и моего острого интереса к спорной микробиологии рака. В 1981-1982, Cantwell сообщил в трех различных публикациях об идентификации плеоморфных кислотостойких CWD бактерий, прежде всего коккоподобной формы, в гистологических препаратах кожи, лимфатических узлов и легких при саркоидозе (7-9). Другие формы микроорганизмов также наблюдались in vivo и были морфологически подобны гигантским L-формам микобактерий, ранее описанных in vitro (10). Микроорганизмы, которые я наблюдал при саркоидоде, были подобны бактериям, связанным с некоторыми формами рака и с некоторыми иммунологическими болезнями неизвестной этиологии. Это исследование было рассмотрено в моей книге ''The Cancer Microbe'' [11]. Возможная роль плеоморфных CWD бактерий при раке также была рассмотрена патологом P Macomber [12].

Плеоморфизм и L-циклы CWD бактерий

Переменное число разновидностей кислотостойких CWD бактериальных форм, обнаруженных при саркоидозе, предполагает сложный жизненный цикл или ''L-цикл'', как было предложено Mattman в 1960 г. [13]. Концепция жизненного цикла оспаривается традиционными микробиологами и плохо известна клиницистам. Традиционно считается, что обычные бактерии размножаются прежде всего делением; таким образом, идея L-цикла для CWD бактерий - действительно спорая микробиологическая концепция. Однако, предложенная микробиология саркоидоза зависит от оценки различных ростовых форм, которых CWD микроорганизмы способны достигать, не только in vitro но и in vivo. Для обзора мировой литературы относительно патогенности и морфологических форм CWD, см. Linda Mattman ''Cell Wall Deficient Forms'' [14].

Обычно, патологи ищут типичные кислотостойкие палочковидные формы Mycobacterium tuberculosis, окрашиваемые в красный цвет, чтобы определить, присутствуют ли кислотостойкие бактерии при саркоидозе. Однако, CWD организмы, обнаруженные in vivo при саркоиде обычно не обнаруживаются в этой форме. Окрашивание аурамин-родамином является другим обычным микроскопическим тестом для выявления скрытой формы микобактериальной болезни, но согласно Moscovic, CWD микроорганизмы при саркоидозе не флуоресцируют [3].

Формы, обнаруженные Moscovic не имеют характерного внешнего вида кислотостойкой бактериальной палочковидной формы. Вместо этого, при саркоидозе могут быть обнаружены круглые кокковые формы, которые имеют размер обычных стафилококков. Другие формы in vivo могут казаться большими (так называемыми ''большие тела''); некоторые - на пределе микроскопической видимости. Имеются доказательства, полученные с помощью электронного микроскопа, что некоторые из самых мелких форм (приближающиеся к размеру вирусов), могут проходить через лабораторные фильтры, предназначенные для фильтации бактерий обычного размера. Нефильтрующиеся микробные формы - критерий CWD бактерий. Так называемый ''вирус туберкулеза'' также является нефильтрующейся формой M.tuberculosis, которую некоторые эксперты по бактериологии туберкулеза считают этиологическим агентом саркоидоза.

Формы, обнаруженные Cantwell in vivo - прежде всего круглые коккоподобные формы. Такие формы лучшие обнаруживаются при помощи окраски, традиционно используемой для демонстрирации бактерий при TB и лепре. Иногда эти формы могут быть обнаружены с помощью красителя Гимза, при окрашивании по Грамму для бактерий и PAS окрашивании для грибов.

Некоторые ''усиленные'' методы окрашивания, специально разработанные для обнаружения CWD микобактерий, рекомендовались Mattman [15]. Тройная окраска по Alexander-Jackson, может увеличивать качество окрашивания кислотостойких организмов, окрашивая их в красный, розовый или сиреневый цвет на синем фоне ткани [16]. Поиск этих форм должен проводиться при самом высоком увеличении, возможном для оптического микроскопа, а именно 1000X, с использованием масляной иммерсии.

Саркоидоз и нанобактерии

Еще одно революционное и дискуссионное направление в современной микробиологии - недавний интерес к нанобактериям, как к возможной причине болезней неизвестной этиологии. Нанобактерии являются ''мостом'' между самыми мелкими бактериями и вирусами. Сайт компании Nanobac Pharmaceuticals предлагает современное исследование этих ультра-микроскопических бактерий и их возможной связи с патологиями человека (http://www.nanobaclabs.com/Research/). Большой интерес представляет факт, что кровь всех людей инфицирована нанобактериями. Это, конечно, должно усилить интерес к роли бактерий при саркоидозе, раке и других дегенеративных болезнях.

В настоящее время не имеется исследований, обнаруживших связь между нанобактериями и саркоидозом. Однако, нанобактерии могут иметь некоторое отношение к ''вирусу туберкулеза'', исследованному Sweany. Кроме того, нанобактерии глубоко связаны с кальцинозом и ''телами Шауманна'', неспецифическими включениями, часто обнаруженными в саркоидных гранулемах. Недавнее исследование Ang и Moscovic идентифицировало антигены M.tuberculosis в телах Шауманна. Эти исследователи утверждают, что это остатки ''трансформированной туберкулезной бациллы'', и, таким образом, ключ к этиологии саркоидоза [17].

Пропионибактерии при саркоидозе

В конце 1970-х, Homma с коллегами сообщили о частой изоляции Propionibacterium acnes в материалах биопсии Японских пациентов с саркоидозом [18]. В 1980-х, Эйб с коллегами изолировали тот же самый микроорганизм в 31 из 40 саркоидных лимфатических узлов [19]. Японские исследователи также культивировали этот организм в 38 из 180 гистологических несаркоидных препаратов.

В 1999, Ishigi с коллегами обнаружили геном P. acnes у 12 из 15 пациентов с саркоидозом. У 3 пациентов без P. acnes был обнаружен геном P. granulosum в материалах биопсии. Был сделан вывод, что пропионибактерии - вероятная причина саркоидоза, по крайней мере в Японии [20]. Это имеет важное значение, поскольку тетрациклин - не только проверенная временем терапия P. acnes (связанная с Propionibacterium acnes и Staphylococcus epidermidis) но теперь предлагается как дискуссионная терапия для саркоидоза.

В 2000 г. Ebe с коллегами также изолировали ДНК пропионибактерий у всех их пациентов с саркоидозом. Они утверждают, что белок RP35 P.acnes вызывает клеточную иммунную реакцию у некоторых пациентов с саркоидозом, но не у индивидуумов без саркоидоза [21]. В обзоре ''Этиология саркоидоза'', Eishi заключает, что саркоидоз может являться результатом воздействия одного или более антигенов пропионибактерий у индивидуумов с наследственными или приобретенными ненормальностями иммунной системы [22].

Криптогенная бактериальная инфекция крови и саркоидоз

Если бы микробиология саркоидоза была ''простой'', бактериальная причина была бы обнаружена много десятилетий назад. По моему мнению, микробиология трудна для постижения потому, что доктора имеют тенденцию ожидать найти тот же самый ''специфический'' вид бактерий в каждом случае саркоидоза, и ожидать подобного появления микроорганизмов в каждом случае. Кроме того, врачи были обучены, что P. acnes и S. epidermidis, обычные кожные контаминанты, не имеют никакого этиологического значения в болезнях подобных саркоидозу и раку. И, как уже было отмечено, идея относительно ''L-цикла'' некоторых микобактерий, отторгается большинством врачей.

Еще более трудна для понимания концепция о возможной связи между различными разновидностями бактерий, которая не была полностью оценена. Например, имеется несомненная филогенетическая связь между кислотостойкими микобактериями и некислотостойким пропионибактериями (также известными как коринебактерии и ''дифтероиды''). Также имеется малоизвестная филогенетическая связь между микобактериями и некислотостойкими ''микрококками'' и даже стафилококками.

Cantwell с коллегами при склеродермии культивировал Staphylococcus epidermidis, которая имеет непостоянные морфологические характеристики, колеблющиеся между чистым кокком и кокко-бациллой (коринебактерия-подобный или актиномицета-подобный микроорганизм), в зависимости от лабораторной среды, где обычно выращиваются бактерии [23]. Такое превращение между двумя различными разновидностями в бактериологии рассматривается как ''невозможное'' и часто воспринимается как признак лабораторного ''загрязнения''. Однако, в 1933 г., Novak и Henrici описали плеоморфный организм, который трансформировался в две различные разновидности; одна форма была чистым кокком, другая форма была палочковидной [24]. Более детальное описание можно найти в работе Cantwell [23].

В ряде статей, изданных в 1970-х, группа Итальянских исследователей, возглавляемых Tedeschi, используя электронную микроскопию, показала, что эритроциты и тромбоциты крови здоровых и больных пациентов в скрытой форме инфицированы плеоморфными бактериями. ''Зернистые тела'' были найдены в пределах эритроцитов и различные микробные формы были культивированы и описаны как микоплазма-подобные и коринебактерия-подобные L-формы бактерий, Staphylococcus epidermidis, микрококки, кокки и кокко-подобные бациллярные формы [25, 26].

Идея, что кровь содержит бактерии, неоднократно поднималась различными исследователями рака. Но эту идею никогда не принимали всерьез, потому что бактерии, которые были обнаружены у пациентов с раком, представляли не более чем смесь несущественных контаминантов, не имеющих никакого этиологического значения. Различные разновидности плеоморфных бактерий обнаруженных при различных формах рака (и саркоидоза) заставляют врачей сомневаться относительно существования специфического микроорганизма для рака.

Группа Tedeschi предположила, что эволюция кокков и дифтероидов (то есть коринебактерий и пропионибактерий), происходящих от форм без клеточной стенки, не связана со специфической болезнью, но является последствием генерализованной криптоинфекции.

Все это указывает, что кровь человека определенно не стерильна и позволяет подозревать, что эти бактерии могут быть вовлечены в патогенез болезней подобных саркоидозу, а также других воспалительных и опухолевых болезней.

Более современное исследование McLaughlin ''Действительно ли плеоморфные бактерии встречаются в крови здоровых людей?'' в Журнале Клинической Микробиологии (декабрь 2002 г.), подтверждает присутствие разнообразных микроорганизмов в крови здоровых людей [29]. Исследование Brown [30] заключило, что у 38 % пациентов с саркоидозом и 41 % группы контроля были обнаружены CWD организмы. Исследование, показавшее наличие нанобактерий в крови, заставляет нас проводить новое исследование крови, чтобы выяснить, какие микроорганизмы она содержит в состоянии здоровья и болезни.

Микробиологи несомненно будут спорить относительно того, как назвать эти организмы. Но намного более важно определить, что эти организмы ''делают'', не только in vitro, но и в пределах организма человека. Что позволяет этим микроорганизмам существовать в гармонии с нами? Что превращает их убийц?

Фильтрующиеся и зернистые формы микобактерий туберкулеза

Хотя врачи и гистопатологи обучены, чтобы распознавать хорошо известные кислотостойкие палочковидные формы M. tuberculosis, они, очевидно, имеют мало знаний и интереса к CWD формам этого микроорганизма. В микробиологии саркоидоза важно признать, что ''классическая'' кислотостойкая палочковидная форма M. tuberculosis - не единственная форма этиологического агента туберкулеза.

Чтобы лучше понимать различные ростовые формы кислотостойких микобактерий, необходимо не только рассматривать ''фильтрующиеся'' формы этих организмов и функции TB ''гранул'', но также и иметь в виду грибковое происхождения микобактерий. В микробиологии известно, что кислотостойкие микобактерии - филогенетический мост между ''высшими'' грибами и ''низшими бактериями. ''Myco'' по Гречески означает гриб; ''ergo'' - бактерии.

В начале двадцатого столетия, саркоидоз был известен как ''доброкачественный лимфогранулематоз'' и позже как ''болезнь Шауманна''. Schaumann и Hallberg, наряду с другими Шведскими исследователями, Gullberg и Hollstrom, знали, что TB микроорганизмы происходят от плеоморфных ''грибов дрожжевого типа'' (fungus of yeast odium type) [31-33]. Длительное и интенсивное микробиологическое исследование культур этого гриба показало сложный микроорганизм со способностью произвести ростовые формы, которые отличались от ''классической'' кислотостойкой палочковидной формы TB.

Например, Hollstrom [33] упоминает ростовые формы бацилл туберкулеза, состоящих из ''яйцевидных клеток'', ''коккоформенных (cocciform)'' организмов, дифтероидов (пропионибактерий и коринебактерий) и классических кислотостойких туберкулезных бацилл. Все это походит на плохо изученные плеоморфные формы, обнаруженные при саркоидозе in vivo, представленные Moscovic и Cantwell.

Как было неоднократно упомянуто, саркоидоз всегда был болезнью, тесно связанной с туберкулезом, даже при том, что инфекционный элемент этой болезни никогда не демонстрировался, к удовлетворению экспертов по саркоидозу. Однако, ''доказательство'', требуемое учеными, требует демонстрации кислотостойких бактерий, подобных M. tuberculosis при саркоидозе. По моему мнению, требование этих доказательств неблагоразумно и необосновано, поскольку имеются другие ростовые формы роста M. tuberculosis, которые игнорировались или пропускались при попытках раскрыть инфекционную этиологию саркоидоза (также как и инфекционную этиологию некоторых форм рака).

Sweany, в двух статьях, изданных в ''American Review of Tuberculosis'' в 1928 г. ''The granules of the tubercle bacillus'' и ''The filterabillity of the tubercle bacillus'', описывает многие ростовые формы этих микроорганизмов, а также их способность произвести патологические изменения при прививке морским свинкам [34,35]. Эта работа несомненно связана с современными данными о плеоморфных CWD микобактериях.

Суммируя итоги исследования необычных ростовых форм M. tuberculosis, известных бактериологам в конце девятнадцатого столетия, Sweeney обращает внимания на некислотостойкие гранулы, зооглея-подобные (zooglear) формы, малые сферические (globoid) тела, эндоспоры, развивающиеся в коккоподобные формы, которые далее развиваются в бациллы, детериорацию форм в сапрофитные микроорганизмы с коккоподобной, бактериальной, дифтероидной и стафилококковой морфологией [34].

После экспериментов на животных с этими формами, Sweany заметил: ''Кажется, имеется стимуляция лимфоидной ткани в легких и прогрессирующее действие на ретикулоэндотелиальные элементы … постепенно приближающееся к типичным анатомическим формированиям при туберкулезе. Этот факт доказывает, что некоторые из фильтрующихся форм (не M. tuberculosis), все же обладают свойством регенерировать M. tuberculosis при пассаже. Это предлагает связь с лимфогранулемой (т.е саркоидозом)'' [35].

Sweany подчеркивает, что ''все микроскопические формы подвергаются вариациям в их развитии'' и ''имеется большие различия между вариациями в искусственной (лабораторной) среде и в живом организме''. Наконец, Sweany был первым, кто обратил внимание на присутствие ''некислотостойких коккоидов'', подобных обычным стафилококкам как различных ростовых форм M. tuberculosis [34].

К сожалению, при поиске бактериологического агента при саркоидозе, современные исследователи в значительной степени игнорируют замечание Sweany, что ''наиболее обычная кислотостойкая бациллярная форма - не единственное проявление этиологического агента туберкулеза'' [34]. И многое из этой ''старой'' бактериологии саркоидоза из прошлого столетия кажется забытым при поиске немикробной причины саркоидоза.

Одной из возможных причин отсутствия интереса к предложенной микробиологии саркоидоза - трудность обнаружения таких микроорганизмов в саркоидной ткани. По моему опыту, обнаружить микроорганизмы не трудно при использовании специального окрашивания и масляной иммерсии. Было бы полезно, если врачи и микробиологи подтвердили (или не подтвердили) присутствие микроорганизмов in vivo при саркоидозе.

В настоящее время, кажется нелепым обсуждать, как назвать эти микроорганизмы. Более важно достигнуть соглашения относительно того, существуют ли эти формы CWD или не существуют in vivo. После того, как это будет выполнено, исследователи могут спорить относительно разновидности микроорганизмов, которая вовлечена в развитие саркоидоза и имеется ли только один тип микроорганизма, вовлеченный в этиологию саркоидоза.

Антибиотикотерапия саркоидоза

До настоящего времени, терапией для саркоидоза остаются иммуносупрессивные и цитотоксические препараты а также кортикостероиды длительного действия. В 1982 г. частое обнаружение бактерий в саркоидной ткани побудило Moscovic предложить терапию тетрациклином [3]. Отмечая неблагоприятные эффекты продолжительного использования стероидов, он размышлял, что ''можно ожидать, что тетрациклин (или аналогичные средства с потенциальным влиянием на белковый синтез CWD) будут клинически эффективны и их использование при саркоидозе должно быть исследовано''.

В 2001 группа Французских дерматологов, возглавляемых Bachelez, сообщила о улучшении у 10 из 12 пациентов с кожным саркоидозом леченных миноциклином и доксициклином [36]. Клинические исследования, подобные этому необходимы, чтобы оценить антибиотики и различные комбинации антибиотиков для лечения саркоидоза. Наиболее вероятно, для лечения саркоидоза потребуется длительная комбинированная терапия, как это требуется для надлежащего лечения туберкулеза.

Заключение

Имеется большое количество исследований, некоторые из которых относятся к 1930-м и 1940-м годам, проведенных различными учеными (Gullberg, Hollstrom, Schaumann и другие), показывающие, что бактерии, связанные с бактериями туберкулеза, также связаны с саркоидозом. Эти исследования в значительной степени игнорировалось, что побудило Moscovic в 1982 г. сказать: '' Если бы усилия, потраченные на доказательства не микобактериальной природы болезни направить на исследования микобактерий, этиология саркоидоза, возможно, давно бы была ясно установлена и более рациональный подход к постановке диагноза и лечению мог бы к настоящему времени быть разработан''.

Ввиду возможной эффективности тетрациклинов для лечении саркоидоза, внимание должно быть направлено на гистопатологическое обнаружение CWD бактерий (или различных ростовых форм M. tuberculosis и филогенетически-связанных пропионибактерий) при этой болезни.

Цель этого обзора состоит в том, чтобы стимулировать дальнейшие исследования ткани для поиска бактерий этого типа при саркоидозе и поддержать пациентов с саркоидозом, которые желают экспериментировать с режимами дозирования антибиотиков.

Хотелось бы надеяться, этот отчет привлечет интерес к имеющей столетнюю историю микробиологии саркоидоза и послужит руководящим принципом гистопатологического исследования саркоидной ткани.

В переводе опущено 28 фотографий и комментарии к ним.