Journal of Clinical Microbiology, August 2002, p. 3060-3063, Vol. 40, No. 8

Поиск ДНК микобактерий, пропионовокислых бактерий и человеческого герпесвируса 8 в тканях греческих пациентов с саркоидозом

M. Gazouli, J. Ikonomopoulos, R. Trigidou, M. Foteinou, C. Kittas, and V. Gorgoulis
Department of Histology-Embryology, School of Medicine, University of Athens, Department of Pathology, ''Sotiria'' Chest Hospital, Athens, Greece

Реферат

Причины саркоидоза неизвестны. В этом исследовании мы сообщаем о наличии ДНК Mycobacterium tuberculosis и Propionibacterium granulosum у значительного процента греческих пациентов с саркоидозом. ДНК человеческого герпесвируса 8 не была обнаружена в тканях греческих пациентов с саркоидозом.

Саркоидоз описывается как системная болезнь, характеризованная наличием неказеозных эпителиоидных гранулем в различных тканях (21). Хотя, этиология саркоидоза остается неясной, было предложено множество этиопатогенетических факторов, в том числе различные инфекционные агенты, из которых микобактерии, возможно, являются наиболее важными. Даже при том, что значительное количество исследований не обнаружили микобактерии в тканях пациентов с саркоидозом (28, 33), несколько исследований предположили участие Mycobacterium avium в развитии саркоидоза (8, 13, 20, 24, 25), в то время как другие исследования предположили участие Mycobacterium tuberculosis (9, 22, 27, 29). Поэтому, убедительная связь между саркоидозом и микобактериальными инфекциями должна быть установлена.

Ishige (18) предположил, что члены семейства Propionibacteria также могли быть вовлечены в патогенез саркоидоза. Недавно, Eishi (7) предложил, что Propionibacterium spp. более вероятно являются причиной саркоидоза чем Mycobacterium spp. Наконец, Di Alberti (5), используя ПЦР, обнаружил наличие ДНК человеческого герпесвируса 8 (HHV-8) в саркоидной ткани, но не материалах биопсии здоровых индивидуумов. Из исследований, представленных выше, очевидно, что никакой единственный агент не может считаться ответственным за все случаи саркоидоза. Противоречия относительно роли микобактерий и других инфекционных возбудителей при саркоидозе, указывают на необходимость дальнейших эпидемиологических исследований, чтобы установить возможную роль этих агентов в развитии саркоидоза.

До настоящего времени, не было опубликовано отчетов, исследующих наличие ДНК пропионовокислых бактерий и HHV-8 у греческих пациентах с саркоидозом, тогда как данные, об обнаружении микобактериальной ДНК ограничены (16, 17).

Цель настоящего исследования состояла в том, чтобы определить частоту обнаружения ДНК микобактерий, пропионовокислых бактерий и человеческого герпесвируса 8 в тканях греческих пациентов с саркоидозом и, таким образом, оценивать возможное участие этих агентов в развитии саркоидоза.

50 зафиксированных в формалине залитых парафином (FFPE) тканей (легкое и лимфатические узлы) пациентов, страдающих от саркоидоза, были собраны в ''Sotiria'' Chest Hospital in Athens, Greece и проанализированы. Кроме того, FFPE ткани 16 пациентов с туберкулезом и 20 пациентов с легочной карциномой были параллельно проанализированы в качестве группы контроля. Диагноз саркоидоз был установлен по совместимой клинической картине: отсутствие признаков текущей инфекции организмами, способными производить гранулематозную болезнь, таких как M. tuberculsosis, и наличие неказеозных гранулем в экземплярах биопсии вовлеченных тканей. Диагноз туберкулез базировался на совместимых клинических данных, рентгенограмме, положительном культуральном исследовании мокроты и наличию казеозного некроза при гистологической экспертизе. Экстракция ДНК из FFPE образцов была произведена согласно ранее описаннной методике (17). Чтобы определить специфичность использумых праймеров, была проведена ПЦР ДНК различных бактериальных организмом (Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis и Salmonella enterica), стерильных парафиновых образцов и микобактерия-негативных, пропионибактерия-негативных и HHV-8-негативных FFPE образцов.

Мы наблюдали положительный сигнал у 33 из 46 пациентов с саркоидозом (71.7 %), используя специфический праймер IS6110 (30). Учитывая, что существуют разновидности M. tuberculsosis, не обладающие IS6110 последовательностью в геноме (34), мы продолжили дальнейший поиск с использованием специфического протеина MBP64 (17). Кроме того, так как диагноз, основанный на обнаружении IS6110 и MPB64 не может различить M. tuberculsosis и другие разновидности (M. bovis, M. africanum и M. microti), мы исследовали наши образцы с видоспецифичными mtp40 праймерами, которые не реагируют на M. bovis, M. africanum и М. microti (4). 27 из 33 образцов были mtp40-положительными, указывая, что большинство образцов имело признаки наличия M. tuberculsosis. Шесть образцов были mtp40-отрицательны, предполагая что, возможно другие члены семейства M. tuberculsosis также могут присутствовать в образцах. Все образцы группы контроля (пациенты с туберкулезом) были IS6110, MBP64 и mtp40 положительны. ДНК M. avium не была обнаружена.

Мы обнаружили P. granulosum у 20 из 46 пациентов. Пациенты с легочной карциномой и с клинически и гистологически зарегистрированным туберкулезом, были P. granulosum - негативны. Интересно, что 20 P. granulosum-положительных образцов также были M. tuberculsosis-положительными. ДНК HHV-8 не была обнаружена.

Данные других исследований, использующих ПЦР для обнаружения микобактериальной ДНК при саркоидозе противоречивы. Значительный процент (71.7 %) обнаружения M. tuberculsosis у наших пациентов поддерживает гипотезу, что этот инфекционный агент может вносить вклад в развитие саркоидоза.

В нашей группе, у 43.47 % пациентов была обнаружена ДНК пропионовокислых бактерий. В отличие от недавних эпидемиологических (7, 18) и иммунологических (6) исследований, которые предполагают центральную роль пропионовокислых бактерий в патогенезе саркоидоза, наши данные не могутт поддержать это предположение, потому что пациенты, у которых была обнаружена ДНК пропионовокислых бактерий, были подгруппой пациентов, у которых была обнаружена ДНК M. tuberculsosis (20 из 33)

Наши результаты подразумевают, по крайней мере частично, возможную микобактериальную этиологию саркоидоза в Греции. Однако, другие бактерии, особенно пропионовокислые бактерии или их антигены, также могут играть пока еще неизвестную этиологическую роль. Возможно, саркоидоз может быть следствием иммунного ответа или повышенной чувствительности, инициированной различными бактериальными антигенами (микобактериями и/или пропионибактериями), ведя к формированию гранулем. HHV-8 не участвует в патогенезе саркоидоза у греческих пациентов, что подтверждает заключения недавнего исследования саркоидоза.